Luminex检测平台

Luminex多因子检测平台是基于xMAP微球技术，通过不用荧光染料比例，标记能够共价偶联不同抗体的微球，实现多种标志物的同时检测。

xMAP微球

x  = The Unknown

M = Multi

A  = Analyte

P  = Profiling

xMAP为聚苯乙烯球，结构影响球的直径，从5.6 μm到6.5 μm不等（表一），表面布满10⁸羧基，可接上特异性识别基团。

表一  不同微球直径及特点

通过两种不同颜色的染料（红外染料、红色染料），分别分为10个梯度，对微球进行染色，可以获得10×10种微球，共100种颜色微球（图一），若加入第三种颜色，则可以获得约500种以上颜色的微球，再将微球编号，并接上特异性识别基团及荧光基团，可以达成多因子检测分析目的。

图一  十种红外染料及十种红色染料混染获得百种微球

doi: 10.3389/fmicb.2017.00055

识别方式

每种类别的微球大约有10⁴个，通过与标曲比对，可以得知样本中含有的标靶量。由于染料为红色及红外色，因此使用635 nm的红光识别微球种类，若该微球与靶向物结合，则其上的荧光基团在525-532 nm的绿光激发下，发出荧光，通过这样的方式，识别微球的种类及结合数。

目前在售的Luminex系列仪器，都使用类似流式仪的流体系统对微球进行分析，主要区别在于96孔板及384孔板的适配，及单孔同时能检测的因子种类（表二）。

表二  仪器类型及特点

优点——对样品量的需求很低，少量就能测！

样本制备

血浆

使用EDTA或肝素抗凝剂收集血浆。收集后30分钟内，以1000g离心15分钟。立即检测或将样品分装后保存在-20℃及以下温度。

细胞培养液上清

通过离心去除颗粒物，立即检测或将样品分装后保存在-20℃及以下温度，避免反复冻融。

组织裂解液

用PBS冲洗组织，并切成1-2mm的组织块。利用组织匀浆仪对PBS种的组织进行匀浆。加入等体积的细胞裂解缓冲液，在室温下裂解30分钟，期间不时轻轻搅拌，最后通过离心去除碎片。立即检测或分装后保存在-70℃及以下温度，避免反复冻融。

血清

使用血清分离管（SST），让样品在室温下凝结30分钟，1000g离心15分钟后收集血清。立即检测或将样品分装保存在-20℃及以下温度，避免反复冻融。

数据展示

图二  不同Donor来源的冻存PBMC细胞因子检测

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