方案 | 预制可追溯全外籍Donor全人源超大抗体库
噬菌体抗体库是将体外克隆的抗体基因片段插入噬菌体载体，转染工程细菌进行表达，然后用抗原筛选即可获得特异的单克隆噬菌体抗体。
库的形成
抗体多样性来源：
1. VDJ或VJ重排时的随机组合（V-D-J Recombination）
2. VDJ或VJ重排时接口处的不确定连接（Junctional Diversification）
3. 重链和轻链的组合多样性（Combinatorial Jonining）
4. 体细胞突变（Somatic Hypermutation）
根据人VDJ片段的数量计算，1.和3.的随机组合多样性约为3×10^6种；2.和4.会在此基础上提高10^8倍，因此理论上，人类抗体多样性约为3×10^14种，但VDJ组合和抗体轻重链组合具有严重的偏向性，所以实际抗体的多样性远低于此，同时还受到单个人B细胞总数不超过10^12的限制，故人天然抗体库的多样性最高为10^12种。
图一 抗体多样性产生机制
噬菌体展示
噬菌体展示技术主要使用丝状噬菌体，M13是其中一种，丝状噬菌体在释放子代时，不会使宿主细菌裂解，而是从受感染的细菌中分泌出噬菌体至培养基上清。
构建时，会使用两个载体：一个原核表达载体，将包膜蛋白III的N末端与抗体片段（比如scFv、Fab或VHH）的C末端融合表达；一个表达载体，在同一宿主菌种表达M13噬菌体的所有结构蛋白和非结构蛋白，前者会组装形成M13噬菌体颗粒，并且因为后者对复制起始点的选择性，优先包装表达抗体片段的载体。这种噬菌体颗粒的外部携带抗体片段蛋白，内部携带对应的抗体基因，简历了抗体的表型和基因型的物理关联，允许通过抗体表型的筛选获得对应的抗体基因型。
图二 M13噬菌体结构示意图
天然抗体库构建
用于构建天然抗体库的样本来源主要有四种：淋巴结、脾脏、骨髓、PBMC。经过系列抗体基因准备过程，抗体片段（Fab、scFv、VHH）基因被连入噬菌粒载体中，携带抗体基因的噬菌粒载体和辅助噬菌体载体被转化进入同一个宿主细菌细胞中，协同包装噬菌体颗粒，构建成噬菌体展示Fab抗体库、scFv抗体库和纳米抗体库。
抗体通过FV区域与抗原结合，该区域由VH和VL组成，分别含有3个CDR区和4个FR区。其中CDR区与抗原直接相互作用，尤其是重链CDR3，在与抗原的相互作用中非常重要。
根据天然抗体的CDR区各个位置的氨基酸组成和比例，人工合成寡核苷酸pool，再以分子克隆方法与FR区固定寡核苷酸片段连接，构建完整的VH、VL、VHH、scFv或Fab基因库，后者经过转化和包装噬菌体，构建合成全合成噬菌体展示抗体库。如果固定VL、VH为合成基因库，最终构建半合成噬菌体展示抗体库；如果VL是天然基因库，VH是合成基因库，最终构建半合成/半天然噬菌体展示抗体库。
全人源超百亿库容噬菌体展示抗体库
• 合规来源
• 全外籍Donor建库
• 库容 ≥ 10^10
• 滴度 ≥ 10^13
• 阳性率＞80%
• 菌抗体库中活菌数 ≥ 5×10^9
• 含100条测序，全长抗体序列＞90%
• QC检测无污染
• 独享抗体库*
*客户可自行选择独享抗体库与否
